當細胞生物學家第一次發(fā)現(xiàn)可能有一種脂質參與他們最喜歡的途徑時，這有點像在馬路對面找到一堵墻(就像當脂質學家在他們的路上找到一種蛋白質一樣……)。

      由于脂質的不同性質，大多數(shù)細胞生物學家都害怕在他們的研究過程中不得不面對這種情況。好消息是，有一些簡單的方法可以幫助克服這一障礙，使研究特定途徑中的脂質變得更容易。在這里，我想介紹一些脂配體相互作用研究的分析和準備工具。

1 覆蓋試驗Overlay assays-鑒定與給定蛋白質相互作用的脂質

      這些分析方法允許鑒定一種或多種脂質與給定蛋白質相互作用。

      與Western-blot原理類似，它們的原理是在表面涂上各種類型的脂質，這些脂質將與已知的蛋白質接觸，這種蛋白質將被標記或抗體臨時檢測到。脂質的載體通常是硝化纖維素膜(圖1)。與點印跡法一樣，需要優(yōu)化一些實驗參數(shù)(如緩沖液、蛋白質純化或蛋白質濃度)。

      當可用蛋白質的數(shù)量有，小的“覆蓋分析格式"可以用少于0.5 mg的蛋白質進行檢測。這是一種簡單的方法來測試一種感興趣的蛋白質對各種脂質的結合能力!

2 下拉試驗Pull-down assays-發(fā)現(xiàn)一種已知脂質的蛋白質伙伴

      對于相反的實驗設置，當您想要識別已知脂質的蛋白質伴侶時，瓊脂糖為基礎的下拉試驗等制備技術將是您的選擇:

*瓊脂糖珠包被確定的脂質可以被進一步孵育與細胞裂解液，上清液，重組蛋白…

* 然后相互作用的復合體通過離心將它們拉下來。

       它允許分離脂質結合蛋白的數(shù)量適合進一步鑒定和表征。它經(jīng)常與細胞裂解液一起用于“撈出"脂質對偶物(圖4)。

3 漂浮試驗Floatation assays-用于更高特異性的蛋白質-脂質相互作用

       當你在尋找更高特異性的蛋白質-脂質相互作用時，另一種基于脂質富集脂質體(用作脂質/配體相互作用的基質支持)的制備方法是可用的。

       與GEM脂筏提取(葡萄糖梯度超離心)類似，脂質體預結合到脂質配體上，將沿著超離心制備的葡萄糖梯度分成幾個部分分布(圖5)。

這些富脂脂質體有許多優(yōu)點:

*聚脂質體PolyPIPosomes是聚合的脂質體，

*增加穩(wěn)定性(長達6個月)，

*生物素標簽，方便鏈霉親和素檢測，

*尺寸均勻(~200 nm)，可進行浮選試驗，

*這些脂質體也可用于:表面等離子體共振，脂質體覆蓋分析，ITC。

        想知道更多，讓你的生活更輕松，以防你偶然發(fā)現(xiàn)“可怕的脂質"嗎?

        你有興趣了解更多關于這些脂配體相互作用工具嗎?

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